Directives de laboratoire pour la détection de l'infection par le virus Monkeypox
Le 23 juillet 2022, le directeur général de l'Organisation mondiale de la santé (OMS) a déclaré l'épidémie mondiale croissante de monkeypox une urgence de santé publique de portée internationale (USPPI). Selon l'OMS, il y a plus de 35 000 cas dans 92 pays/territoires, et 12 décès au 17 août. La plupart des cas signalés (avec antécédents de voyage) se sont rendus dans des régions d'Europe et d'Amérique du Nord.
Le monkeypox est une maladie rare causée par une infection par le virus du monkeypox (MPXV), un virus à ADN double brin enveloppé qui appartient à la même famille de virus qui causent la variole. Ce virus peut être transmis par contact avec des fluides corporels, des lésions cutanées ou des muqueuses internes avec des symptômes tels que fièvre, maux de tête et douleurs musculaires. La période d'incubation du monkeypox est généralement de 6 à 13 jours mais peut aller de 5 à 21 jours (environ trois semaines).
Selon l'OMS, les meilleurs échantillons de diagnostic proviennent directement de l'éruption cutanée, du liquide ou des croûtes, ou d'une biopsie lorsque cela est possible. D'autres méthodes telles que la détection d'antigènes et d'anticorps peuvent ne pas être utiles car elles ne font pas la distinction entre les orthopoxvirus.
Une approche basée sur les risques est recommandée pour la manipulation des échantillons provenant de cas suspects, probables ou confirmés de monkeypox en laboratoire. Par conséquent, les procédures de détection de la présence du MPXV, qui est classé comme agent pathogène du groupe de risque 3, doivent être effectuées dans un laboratoire de niveau de sécurité biologique 2 en utilisant la liste d'équipements ci-dessous.
Guide d'équipement pour la détection du virus Monkeypox
Stockage des échantillons et des réactifs
Les échantillons MPXV sont recommandés pour la réfrigération entre 2 °C et 8 °C ou doivent être congelés (-20 °C ou moins) dans l'heure suivant le prélèvement. Si le temps de transport dépasse sept jours, les échantillons doivent être conservés à -20°C ou moins. Pendant ce temps, -70°C est conseillé pour le stockage à long terme des échantillons (>60 jours à compter de la collecte).
Les réfrigérateurs de laboratoire, les congélateurs de laboratoire et les congélateurs à très basse température Biobase sont équipés de systèmes de réfrigération bien conçus et de matériaux de haute qualité adaptés au stockage d'échantillons biologiques sensibles à la température qui nécessitent des conditions de stockage critiques.
Manipulation et préparation des échantillons
Le MPXV peut être transmis pendant la phase de traitement des échantillons en raison de matériel contaminé ou de méthodes inappropriées. En conséquence, des mesures de biosécurité accrues doivent être observées. Avant l'inactivation de l'échantillon, les échantillons provenant de patients suspects de MPXV doivent être préparés dans une enceinte de biosécurité fonctionnelle de classe II ; cependant, cela n'est pas nécessaire pour les échantillons correctement inactivés.
Outre la protection offerte par les enceintes de sécurité biologique, les enceintes de sécurité biologique de classe II Biobase sont conformes aux normes NSF 49 et EN 12469 avec des fonctionnalités conviviales et sont recouvertes de poudre antimicrobienne sur toutes ses surfaces peintes externes et internes pour une sécurité améliorée. Les centrifugeuses sont nécessaires pour la séparation des composants liquides et solides de l'échantillon. Des gobelets de sécurité ou des rotors scellés sont conseillés s'ils sont essentiels à la procédure.
Détection et analyse
Des tests d'amplification des acides nucléiques (TAAN) sont effectués pour confirmer l'infection par le MPXV. Pour détecter des séquences d'ADN viral uniques, on utilise soit la PCR en temps réel, soit la réaction en chaîne par polymérase (PCR) conventionnelle. Il y a deux étapes impliquées dans la détection de virus. La première PCR détecte les orthopoxvirus mais n'identifie pas l'espèce tandis que la seconde PCR (ou séquençage) détecte spécifiquement le MPXV.
Un thermocycleur PCR en temps réel fournit une amplification efficace des acides nucléiques pour l'analyse des virus. Biobase propose les nouveaux cycleurs thermiques PCR Swift™ avec un ordinateur intégré pour un fonctionnement autonome à partir de l'entrée, de la surveillance et de l'analyse du programme PCR.